a. 清洗與再生
如果發生峰形改變、峰分叉、出現肩峰、保留時間改變、分離度變化或柱壓升高,說明色譜柱可能已被污染。通常情況下,用純有機溶劑進行沖洗(小心避免緩沖液出現沉淀)就足以去除污染物。如果沖洗不能解決問題,可采用以下清洗和再生步驟灌注色譜柱。請根據樣品和/或您認為污染色譜柱的物質的性質,選擇與之匹配的常規清洗方法(見表3)。用20倍柱體積(例如對于4.6×250 mm色譜柱,使用80 mL溶劑)HPLC級溶劑沖洗色譜柱。將流動相溫度升至35℃~55℃可以提高清潔效率。
表3:色譜柱清洗溶劑使用順序和其他選項
保護柱需要根據樣品污染情況定期更換。當系統背壓穩步上升至設定壓力限值時,通常表明需要更換保護柱。突然出現分叉峰也表明需要更換保護柱。
b. 存放
為了盡可能延長色譜柱壽命和提高性能,使用色譜柱之后請用100%乙腈保存保存色譜柱。請勿使用含緩沖液或鹽的水性流動相保存色譜柱。如果流動相洗脫液中含有酸/堿性添加劑、緩沖液或鹽,請先用至少10倍柱體積(常用色譜柱的柱體積見表1)HPLC級水沖洗色譜柱,再用至少15倍柱體積HPLC級100%乙腈沖洗色譜柱,然后再儲存。如果不執行這些步驟,可能導致緩沖鹽在色譜柱內沉淀。使用隨附的端塞完全密封色譜柱,防止溶劑蒸發導致柱床變干。
注:如果色譜柱運行了含甲酸鹽(如甲酸銨、甲酸等)的流動相,并且之后使用100%乙腈進行沖洗,那么在重新安裝色譜柱并再次運行含甲酸鹽的流動相時,柱平衡花費的時間可能略長。